帶你學會一種藥物研究利器——等溫滴定量熱法

等溫滴定量熱法(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是近年來發(fā)展起來的一種研究生物熱力學與生物動力學的重要方法，它通過高靈敏度、高自動化的微量量熱儀連續(xù)、準確地監(jiān)測和記錄一個變化過程的量熱曲線，原位、在線和無損傷地同時提供熱力學和動力學信息。

ITC檢測方式與化學反應中的酸堿滴定法相似，在ITC測定中，首先將一種反應物置于一個溫控樣品池中，并通過一個熱電偶回路與一個參比池相偶聯，樣品池和參比池處于相同的外部環(huán)境。特定的滴定劑（按實驗需要選擇）定量滴加到樣品池中，當樣品與滴定劑發(fā)生反應時，樣品池和參比池的溫度會發(fā)生變化，反應變化的能量可以被 ITC檢測儀靈敏地檢測出來，并通過正反饋或負反饋觸發(fā)恒溫裝置保持溫度恒定。在反應過程中涉及到的熱動力學參數，如結合常數、結合位點數、反應焓變及熵變等，這些熱動力學參數可以經等溫滴定量熱儀自帶的軟件擬合處理獲得，并經過軟件處理間接獲得吉布斯自由能、恒壓摩爾熱熔等。通過這些參數，可以獲得分子間反應的詳細信息。蛋白質、核酸等生物大分子有序空間結構或復合物的形成都是可逆的熱驅動過程，使用ITC技術可以敏銳檢測到生物分子相互作用（包括分子間和分子內部）過程中熱量的變化。這是基于此，等溫滴定量熱技術廣泛應用于生物及醫(yī)藥等相關領域。

等溫滴定量熱技術的優(yōu)勢包括：快速、準確、樣品用量小、對反應體系的要求不高（如對體系的透光度、渾濁度、粘滯度要求不高），通過對反應過程中的熱動力學檢測及相關參數的計算，可以特異性地反應分子間相互作用的程度。

如果小伙伴們要進行分子間相互作用的研究，如研究蛋白質與蛋白質的相互作用、蛋白質與糖相互作用、藥物與蛋白質相互作用、小分子物質與蛋白質間相互作用、酶促反應動力學分析、核酸與核酸相互作用、核酸與小分子相互作用等，可以考慮運用等溫滴定量熱技術進行檢測。

艾柏森提供等溫滴定量熱法服務

艾柏森生物可提供優(yōu)質的等溫滴定量熱法（Isothermal Titration Calorimetry, ITC）服務，獲得分子相互作用的完整熱力學參數。ITC通過高靈敏度、高自動化的微量量熱儀連續(xù)、準確地檢測和記錄一個變化過程的量熱曲線，原位、在線和無損傷地同時提供熱力學和動力學信息。

ITC提供了一種非常簡單而且準確的方法用于抗體的質量控制以及抗體和抗體產品的性質分析。ITC可快速有效的測定多種參數，例如抗體親和力（Ka）、抗原結合熱（H）以及抗原抗體的結合比（n），結合熱還可用來指示抗原抗體在體內、體外的相互作用。

在ITC實驗中，一個配體（如受體、抗體）分子在恒溫條件下滴定到另一個相互作用分子的溶液中，結合釋放的熱（H）被實時記錄下來。連續(xù)進行多次滴定，分子結合釋放或吸收的熱直接正比于結合的分子數量，當系統(tǒng)達到飽和時，只能觀察到稀釋熱。將每次滴定產生的熱效應與滴定和被滴定分子的摩爾比作圖，可以得到一條結合曲線（Figure 1）。ITC能自動完成滴定、數據采集和分析，使整個實驗過程非常簡單。

Figure 1. Basic principle of isothermal titrationcalorimetry

實驗流程：