磁珠質粒提取試劑盒

使用步驟

1、取 5-10 mL 過夜培養菌液加入離心管中，12000 rpm 離心 2 min 收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入 250 uL Buffer PI (已加入 RNase A)，使用移液槍或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮菌體沉淀，確保無菌塊。37C靜置 15 min，以除去 RNA。

3、向離心管中加入 250 L Buffer P2，溫和上下顛倒混勻 4-6 次，充分混勻使菌體裂解，此時溶液應變得清亮粘稠。

注意:溫和地混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組 DNA。所用時間不應超過 5 min，以免質粒受到破壞。

4、向離心管中加入 350 L Buffer P3，立即溫和上下顛倒混勻 8-10 次，充分混勻，此時應出現白色絮狀沉淀，12000 rpm 離心 10 min。注意:P3 加入后立即混合，避免產生局部沉淀。如果離心完仍有沉淀漂浮，可延長離心時間取上清。

5、將步驟 4 中的上清液轉移到新的 2 mL 滅菌離心管中，加入等體積異丙醇，混勻，加入50 uL 輕基磁珠，顛倒混勻 1 min，室溫放置 2 min。

6、將步驟 5 中的離心管放在磁力架上靜置，磁珠吸附后，小心吸去液體。

7、將離心管從將離心管從磁力架上取下，加入 600 L Buffer Pw (請確認是否加入無水Z醇)，混勻 2 min。

注意:加入漂洗液 PW 后，室溫靜置 2 min，有助于更好的去除雜質。

8、將離心管放置于磁力架上靜置，磁珠吸附后，小心吸去液體。

9、將離心管從磁力架上取下，加入 600 uL Bufer PW，混勻2 min。

10、將離心管放置于磁力架上靜置，磁珠吸附后，棄廢液，吸盡管底管蓋的液體。

11、將離心管置于磁力架上，室溫晾干 15 min。注意:乙醇殘留會抑制后續的酶反應，所以晾于時要確保乙醇揮發干凈。但也不要干燥太長時間，以免難以洗脫質粒 DNA。

12、將離心管從磁力架上取下，加入 100-200 L 洗脫緩沖液 TB 或 ddHO (洗脫液可在水浴鍋中預熱)，振蕩混勻，置于 56C水浴鍋中，孵育 10 min，期間每隔2 min 顛倒混勻。

13、將離心管放置于磁力架上，磁珠吸附后，小心將質粒 DNA 溶液轉移至一個新離心管中，并于-20C保存。